蛋白质就是构成人体组织器官的支架和主要物质，在人体生命活动中，起着重要作用，可以说没有蛋白质就没有生命活动的存在。

蛋白质的结构

蛋白质组成的基本单位是氨基酸

蛋白质的理化性质

蛋白质的两性电离

蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外，氨基酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液pH条件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团，而蛋白质中不同的氨基酸残基连接不同的侧链，所以蛋白质带有不同的电荷。

蛋白质的理化性质

蛋白质的等电点( isoelectric point, pI) 当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。

蛋白质的理化性质

变性的本质破坏非共价键和二硫键，不改 变蛋白质的一级结构。

造成变性的因素 如加热、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、重金 属离子及生物碱试剂等 。

脉冲场凝胶电泳

当双链DNA分子超过一定的大小以后，DNA双螺旋的半径超过了凝胶的孔径，在琼脂糖中的电泳速度会达到极限，此时凝胶不能按照分子大小来筛分DNA,脉冲场电泳就解决了这一难题

脉冲电泳是在两个不同方向的电场，周期性交替进行的，DNA分子在交替变换方向的电场中作出反应所需的时间显著地依赖于分子大小，DNA 越大，这种构象改变需要的时间越长，重新定向的时间也越长，于是在每个脉冲时间内可用于新方向泳动的时间越少，因而在凝胶中移动越慢。脉冲场凝胶电泳可以用来分离大小从10kb到10Mb的DNA分子

脉冲场凝胶电泳

1 仪器： WD-2101A脉冲电泳系统

2 配套试剂：脉冲电泳专用琼脂糖(SeaKem Gold Agarose)、TBE

3 染料：GelRed等

在凝胶电泳中，温度越高，DNA移动的速度越快，但是条带的清晰度和分辨率会明显下降。温度过高会导致DNA带变形或解链，一般设置电泳温度为14℃

常用缓冲液是0.5×TBE  H9812，2.2s-63.8s，19h

脉冲场电泳常见问题及解决办法

1）凝胶在缓冲液中漂浮–蠕动泵的速度太快或太慢， 调到合适的速度

2）缓冲液不流动或流速慢–检查冷却泵：当冷却泵制 冷时，如果蠕动泵没有开，会造成管道内结冰，导 致管道堵塞

3）电泳条带扭曲–流速太低，导致制冷不充分，或不 均一、缓冲液的体积不能太小

4）条带变粗–减少上样量

5）条带拖尾或模糊–电场转换时间不合适，优化转换 电场转换时间、上样量太高，调整样品浓度

6）大片段DNA不能有效分离–将低电压、延长电场转换 时间

7）条带弯曲–缓冲液缓冲能力下降，更换缓冲液、上 样时样品块被挤碎、泵速度太慢

聚丙烯酰胺凝胶电泳

聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺（简称Acr）和交联剂N，N-甲叉双丙烯酰胺（简称Bis）在引发剂（eg.APS）和加速剂（eg.TEMED）的作用下聚合并联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称PAGE）。

聚丙烯酰胺凝胶有下列优点：

1 在一定浓度时，凝胶透明，有弹性，机械性能好。

2 化学性能稳定，与被分离物不发生化学反应。

3 对pH和温度变化较稳定。

4 几乎无电渗作用，只要Acr纯度高，操作条件一致，则样 品分离重复性好。

5 样品不易扩散，且用量少。

6 凝胶孔径可通过选择单体及交联剂的浓度调节。

7 分辨率高，尤其在不连续凝胶电泳中，集浓缩、分子筛和 电荷效应为一体，因而较醋酸 纤维薄膜电泳、琼脂糖电 泳等有更高的分辨率。

聚丙烯酰胺凝胶聚合

聚合原理

1.聚丙烯酰胺是由丙烯酰胺（Acr）和甲叉双丙烯酰胺（Bis）在催化剂作用下合成的。 催化系统常用有两种： 过硫酸氨—TEMED化学催化聚合系统 此系统中，四甲基乙二胺（TEMED）称为加速剂，它能以自由基的形式存在。微量的TEMED的加入，可使过硫酸氨（APS，引发剂）形成自由基。这些自由基的产生可以引发丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的交联反应，形成具有一定孔径的聚丙烯酰胺凝胶。

2. 核黄素—TEMED光聚合催化系统 此系统中，核黄素经紫外线光解形成无色基，再被痕量氧氧化形成自由基，引发聚合反应。TEMED的存在，可以加速聚合，本催化系统主要用用于大孔浓缩胶的配置。

凝胶孔径的可调性及性质

1）聚丙烯酰胺凝胶的孔径的大小是由单体和双体在凝胶中的总浓度（T），以及双体占总浓度的百分含量（C）即交联度决定的。通常凝胶的筛孔、透明度和弹性是随着凝胶浓度的增加而降低的，而机械强度却随着凝胶浓度的增加而增加。

2）凝胶浓度与孔径的关系： T与C不仅与凝胶的机械性能有关，还与凝胶的孔径关 系极为密切。一般讲，T浓度大，孔径小，移动颗粒 穿过网孔阻力大。此外，孔径还同Acr与Bis的比例有 关，Bis占Acr总浓度5%时，孔径最小。

3）凝胶浓度与被分离物相对分子量质的关系：由于凝胶浓度不同，平均孔径不同，能通过可移动颗粒的相对分子质量也不同。在操作时，可根据被分离物相对分子质量大小选择所需凝胶的浓度范围。也可先选用7.5%凝胶(标准胶)，因为生物体内大多数蛋白质在此范围内电泳均可取得较满意的结果。如分析未知样品时也可用4%-10%的梯度胶测试，根据分离情况选择适宜的浓度以取得理想的分离效果。

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳:

1 仪器：垂直系列电泳槽；低、中、高压电源；恒温循环器

2 试剂： 丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、过硫酸铵、TEMED、 考马斯亮蓝\硝酸银、凝胶缓冲液、非变性上样缓 冲液、Tris碱、甘氨酸等

聚丙烯酰胺凝胶电泳

变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 1 仪器：垂直系列电泳槽；低、中压电源、恒温循环器 2 试剂： 丙烯酰胺、N,N’-甲叉双丙烯酰胺， SDS（ 十二烷基硫 酸钠）溶液、1.5MTris-HCl(pH8.8）、0.5MTris- HCl(pH6.8）、TEMED、10%(w/v)过硫酸胺溶液、SDS- Page上样缓冲液:（ 0.5M Tris（ pH6.8）缓冲液、甘油、 10%SDS 、二硫苏糖醇、溴酚蓝）、Tris、甘氨酸、SDS 、考马斯亮蓝 \硝酸银等

SDS-Page，在蛋白质裂解液中加入 SDS和疏基乙醇或DTT

巯基乙醇或DTT可使蛋白质分子中二硫键还原，使多肽分成单个亚单位。

SDS-PAGE时，在蛋白质裂解液中加入SDS和疏基乙醇或DTT

PAGE据其有无浓缩效应，分为连续系统与不连续系统

连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷及分子筛效应； 不连续系统电泳体系中由于缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应、分子筛效应，还具有浓缩效应，故分离效果更好。 不连续的聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质，利用凝胶层的不连续性、缓冲液离子的不连续性、PH的不连续性及电位梯度的不连续性，使样品在不连续的两相间积聚浓缩成很薄的起始区带，然后进行分离。

样品浓缩效应

1） 凝胶孔径的不连续性： 浓缩胶为大孔胶；分离胶为小孔胶。在电场作用下，样品颗粒在 大孔胶中泳动的阻力小，移动速度快；当进入小孔胶时，受到的阻 力大，移动速度减慢。因而在两层凝胶交界处，样品迁移受阻而压 缩成很窄的区带。

2） 电位梯度的不连续性： 电泳开始后，快离子的快速移动会在其后形成一个离子强度很低 的低电导区，使局部电位梯度增高，将蛋白质浓缩成狭窄的区带

缓冲体系离子成分及pH值的不连续性

 

 

 

Tris:缓冲配对离子，维持溶液的电中性及pH值 Cl-: 在电场中迁移率快，前导离子(leading ion)，快离子。 Gly:其pI =6.0，在pH6.8的浓缩胶缓冲体系中，甘氨酸解离度很小，因而在 电场中迁移很慢，称为尾随离子（trailing ion），慢离子。当进入 pH8.8的分离胶时，甘氨酸解离度增加，其有效迁移率超过蛋白质;因此 Cl-及NH2CH2COO-沿着离子界面继续前进。高电势梯度不存在了，各种蛋 白质仅会由于其分子量或构型的不同，在一个均一的电势梯度和pH条件 下通过一定孔径的分离胶时所受阻滞的程度不同，表现的泳动率的不同 被分开 大多数蛋白质在pH6.7或8.3时均带负电荷，在电场中，都向正极移动。

分子筛效应

大小和形状不同的蛋白质通过一定孔径分离胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率 ，这就是分子筛效应。

电荷效应

蛋白质样品在界面处被浓缩成一狭窄的高浓度蛋白质区，但由于每种蛋白质分子所带有效电荷不同，因而泳动率也不同，因此各种蛋白质就按泳动率快慢顺序排列成一个一个区带。在进入分离胶时，电荷效应仍起作用。 目前，PAGE连续体系应用也很广，虽然电泳过程中无浓缩效应，但利用分子筛及电荷效应也可使样品得到较好的分离，加之在温和的pH条件下，不致使蛋白质、酶、核酸等活性物质变性失活，也显示了它的优越性。

PAGE电泳据电泳装置不同分为圆盘及垂直的板状两种

前者凝胶是在玻璃管中聚合，样品分离区带染色后呈圆盘状，因而称为圆盘电泳； 后者凝胶是在两块间隔几毫米的平行玻璃板中聚合，故称为垂直板状电泳。两者电泳原理完全相同。

蛋白质进行PAGE时，常用垂直板电泳。

垂直板电泳的优越性有：

表面积大而薄，便于通冷却水以降低热效应，条带更清晰。

在同一块胶板上可同时进行10个以上样品的电泳，便于在同一条件下比较分析鉴定，还可用于印迹转移电泳及放射自显影。

胶板制作方便，易剥离，样品用量少，分辨率高，不仅可用于分析，还可用于制备。

胶板薄而透明，电泳染色后可制成干板，便于长期保存与扫描。

可进行双向电泳。

核酸(nucleic acid)

定义：

核酸是以核苷酸为基本组成单位的生物大分子，携带和传递遗传信息。

DNA的功能

DNA的基本功能是以基因的形式荷载遗传信息，并作为基因复制和转录的模板。它是生命遗传的物质基础，也是个体生命活动的信息基础。

基因从结构上定义，是指DNA分子中的特定区段，其中的核苷酸排列顺序决定了基因的功能。

RNA的种类、分布、功能

电泳

电泳是带电颗粒在电场作用下，向着与其电荷相反的电极移动的现象。 在一定pH条件下，每一种分子都具有特定的电荷（种类和数量）、大小和形状，在一定时间内它们在相同电场中泳动速度不同，各自集中到特定的位置上而形成紧密的泳动带。这就是带电粒子可以用电泳技术进行分离、分析和鉴定的基本原理。
影响泳动度的因素

1. 电场强度：

电场强度是指每厘米的电位降，也称电位梯度(电势梯度)。电场强度越高，则带电颗粒泳动越快。根据电场强度的不同，电泳可分为： 常压(100-500V)电泳。其电场强度为2-10V/cm。分离时间较长，从数小时到数十小时 ，适合于分离蛋白质等大分子物质。如我厂生产的DYY-6D、 6C、 8C等 高压(2000-10000V)电泳。其电场强度为50-200V/cm，电泳时间很短，有时只需几分钟。多用于分离氨基酸、多肽、核苷酸、糖类等小分子物质。如DYY-15D、 DYY-12型、 DYY-12C、 DYY-10C、 DYY-11型

2 溶液的性质

1)PH值

溶液的PH决定带电颗粒的解离程度，也即决定其带静电荷的量。对蛋白质而言，溶液pH值离等电点越远，则颗粒所带的净电荷越多，泳动速度也越快；反之，则越慢。因此分离某种蛋白质混合液时，应选择合适的pH,使欲分离的各种蛋白质所带的电荷数量有较大的差异

2)离子强度

溶液的离子强度一般在0.02-0.2之间，电泳较合适。若离子强度过高，则会降低颗粒泳动速度；若离子强度过低，则缓冲能力差，往往会因为溶液PH值的变化而影响泳动度的速率

 

3)溶液黏度

泳动度与溶液黏度是成反比关系

3 颗粒性质

颗粒直径、形状以及所带静电荷量对泳动度有较大的影响。一般来说，颗粒的静电荷量越大，或其直径越小，或其形状越接近球形，在电场中的泳动速度就越快。反之，则越慢

4 电渗

电泳缓冲液相对于固体支持物的移动称电渗。当支持物不是绝对惰性物质时，常会因为支持物上存在的离子基团如羧基、羟基等吸附电极溶液中的正离子，使靠近支持物的溶液层相对带电，向负极移动，反之，若支持物的离子基团吸附溶液中的负离子，则溶液层向正极移动。电渗作用会影响颗粒的泳动度，因此，在电泳时，电渗小些为好。

5 焦耳热 电泳时会产生焦耳热，使介质粘度下降，分子运动加快，迁移率增加，同时温度过高会使样品中的生物大分子变性失活，因此电泳时，要控制电压或电流，也可安装冷却散热装置。如我厂生产的DYCZ-24EN,DYCZ-24F,均具有冷却循环装置,可与WD-9412A型恒温循环器配套使用

Q=I2Rt

Q-释放出的热量，I-电流强度，R-电阻，t-电泳时间

6.支持物

现代电泳多在固体支持物上进行，使样品中的不同组分形成不同的区带，称区带电泳。电泳结束后，支持物可以方便地进行染色等后续处理。 对支持物的一般要求是均匀，吸附力和电渗小，机械性能好，便于染色或紫外光下检测，故透明较好，无紫外吸收。常用支持物有滤纸，醋酸纤维素薄膜，淀粉凝胶，聚丙烯酰胺凝胶，琼脂糖凝胶等 支持物性质不同也会影响泳动速率，如琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶都有大小不同的筛孔，在筛孔大的凝胶中溶质颗粒的泳动速率快，反之则慢。

标准模式(ST)：定时到时只报警不关输出
定时模式(Time)：定时到时既报警并且关输出
伏时模式(VH)：输出不论在何种稳态下只有在电压( 伏) 与工作时间
( 小时) 的乘积(VH) 达到设定值时才报警并关输出
分步模式(Step)：输出按步(1-9 步) 及模式 ( 定时或伏时) 分别设定及执行
过载保护(OverLoad!)：输出达到一定值且负载接近短路状态时加以 保护
空载保护(NoLoad!)：负载接近开路状态且输出电压较高时加以保护
变载保护：正常工作时限制负载剧烈变化引起的不良影响
过压保护(Overrun_U)：输出电压超过极限时加以保护
过流保护(Overrun_I)：输出电流超过极限时加以保护
过功率保护(Overrun_P)：输出功率超过极限时加以保护
短路保护(Short!)：输出端短路且输出电流达到一定值时加以保护
外壳漏电保护(GND-Leak)：输出电极与外壳相连并使其带电时加以保护

对于分子量大的样品，如大分子核酸、病毒等，一般采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。

琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷。琼脂糖是直链多糖，它由D-半乳糖和3,6-脱水-L-半乳糖的残基交替排列组成

琼脂糖与琼脂的区别

琼脂是由琼脂糖（agarose）和琼脂果胶（agaropectin）组成的。琼脂糖的结构单元是 D-半乳糖和3.6-脱水-L-半乳糖；琼脂果胶是由许多更小的分子组成的异质混合物。它们的结构相似，但琼脂果胶带硫酸根和羧基组分，凝胶能力差。 在琼脂糖制备过程中需要把琼脂果胶尽量去除，否则琼脂糖有可能存在极微量硫酸根和丙酮酸取代电离基团，就会造成电内渗，电内渗对质点的移动产生影响。质量较好的琼脂糖硫酸根含量比较低，通常在0.2%以下，电内渗比较小，通常在0.13%以下。 简言之，琼脂糖是从琼脂中精细提取的，有自身独特的性质，所以琼脂糖要比琼脂贵得多。

琼脂糖凝胶电泳：实验原理

1.DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。

2.DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA的分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。

3.DNA 分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系。凝胶电泳不仅可分离不同相对分子质量的DNA ，也可以分离相对分子质量相同，但构型不同的DNA 分子。

琼脂糖凝胶电泳

1. 根据电泳需要，配置合适浓度的电泳及制胶缓冲液。一般为 1× TAE或0.5×TBE。 注意：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相同的。

2. 根据制胶量及凝胶浓度，在加有一定量的电泳缓冲液的三角锥瓶中，加入准确称量的琼脂糖粉。 注意：总液体量不宜超过三角锥瓶的50%容量。

3. 在微波炉中加热溶解琼脂糖应注意：琼脂糖充分完全溶解，否则，会造成电泳图像模糊不清。加热时如胶液剧烈沸腾发泡，停止加热。微波炉中加热时间不宜过长。

4.使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入溴化乙锭(EB)溶液使其终浓度为0.5ug/ml，并充分混匀——不提倡使用。 注意：溴化乙锭是一种致癌物质。使用含有溴化乙锭的溶液时，请戴用手套。溴化乙锭在可见光下会分解。

5.将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在5－8 mm 之间。 注意：不要产生气泡，溶液温度太高(>60℃)，会使得水分 过分蒸发，改变凝胶离子浓度，影响电泳效果。

6.在室温下使胶凝固（大约30 分钟），然后放置于电泳槽中进行电泳。 注意：凝胶不立即使用时，用保鲜膜将凝胶包好在4℃下保存，或者放在制胶的缓冲液中，一般可保存2～5 天。

琼脂糖凝胶电泳

1 仪 器：水平电泳仪、中低压电泳仪电源、凝胶成像 分析系统 2 配套试剂：

（1）介 质：琼脂糖凝胶

（2）缓冲液：TAE缓冲溶液（Tris碱、乙二胺四乙酸 二钠二水、冰乙酸） TBE缓冲溶液（ Tris碱、乙二胺四乙酸 二钠二水、硼酸）

（3）上样缓冲液： 6×DNA Loading Buffer（DNA样 品专用包含：EDTA、甘油、二甲苯青 、溴酚蓝）

（4）染 料： EB\ Gelred \ goldview \ GenGreen \ GenView \SYBRGreen等荧光染料

5 耗材： 灭菌的白枪头、黄枪头、蓝枪头、200ul\500ul\1.5ml离 心管等 6 DNA Marker 根据待测物分子量来定

琼脂糖凝胶电泳缓冲液

有几种缓冲液适用于天然双链DNA的电泳 Tris-乙酸盐和EDTA缓冲液（TAE) Tris-硼酸盐缓冲液(TBE) Tris-磷酸盐缓冲液(TPE)

琼脂糖凝胶缓冲液

琼脂糖凝胶缓冲液

三者之中，TAE的缓冲能力最低，双链线状DNA片段在TAE中比在TBE或TPE中迁移快10%,对于高分子量的DNA，TAE的分辨率略高于TBE或TPE，对于低分子质量的DNA，TAE要差些。用于分析复杂基因组的Southern印迹均用TAE电泳缓冲液制备凝胶和电泳。超螺旋DNA在TAE中的电泳分辨率要好于TBE。

琼脂糖凝胶缓冲液

TBE可以使用2-3次左右，而TAE用1-2次就要更换。电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲性能下降，可能使DNA条带模糊或不规则DNA带迁移。 电泳缓冲液刚好没过凝胶1-2mm为好，太多则电流加大，凝胶发热。

琼脂糖凝胶上样缓冲液

上样缓冲液是上样时与样品一起加入泳道的。上样缓冲液有三个作用：

1）增加样品密度；

2）使样品带有颜色，便于上样操作；

3）其中的指示剂在电场中以可以预测的泳动速率 向阳极迁移。 上样缓冲液有几种，但使用的指示剂基本都包括溴酚蓝和二甲苯氰FF。

琼脂糖凝胶上样缓冲液

溴酚蓝在琼脂糖凝胶中迁移速率是二甲苯氰FF的2.2倍，这一特性与琼脂糖凝胶的浓度无关； 在0.5×TBE琼脂糖凝胶电泳中溴酚蓝的速率约与长约300bp的线性双链DNA相同，在0.5%-1.4%浓度的琼脂糖凝胶中基本不会变化。 含有的甘油可以加大样品的密度，使其大于TAE的浓度而沉降到点样孔中，防止样品飘出点样孔

1） Acr及Bis的纯度：应选用分析纯的Acr及Bis，如试剂不纯，含有杂质或丙烯酸时，则凝胶聚合不均一，或聚合时间延长甚至不聚合， 因而需进一步纯化。 Acr和Bis贮液的pH值为4.9-5.2，当pH值的改变大于0.4pH单位则不能使用，因在偏酸或偏碱的环境中，它们可不断水解放出丙烯酸和NH4+ 而引起pH值改变，从而影响凝胶聚合。 因此，配制的Acr和Bis贮液应置棕色瓶中，4℃贮存 ，存放期一般不超过1-2个月为宜。

2）AP、核黄素、TEMED：增加AP和TEMED可加快聚合速率，但过量的AP和TEMED会引起电泳时烧胶和谱带变形。应选择合适的配方使聚合在40-60min内完成。

3）pH：碱性条件下聚合快，但碱性过强时胶硬而脆，需高pH时应减少AP和TEMED用量，制酸性胶可加AgNO3等促进聚合。

4）温度：温度高聚合快，但高浓度凝胶聚合时易产生小气泡，低温(5℃)聚合凝胶会变得脆而混浊，一般25-35℃聚合较好。

5）氧分子：氧分子阻碍凝胶聚合，故不含SDS的凝胶先抽真空脱气，再加引发剂。

聚丙烯酰胺凝胶电泳

PAGE应用范围广，可用于蛋白质、酶、核酸等生物分子的分离、定性、定量及少量的制备，还可测定相对分子质量、等电点等。 聚丙烯酰胺凝胶电泳又有以下几种：

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

连续密度梯度电泳

聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳

聚丙烯酰胺凝胶双向电泳

聚丙烯酰胺凝胶电泳 （DNA序列分析）

1 仪器： PCR扩增仪（96孔）、序列分析电泳槽：DYCZ-20C\DYCZ-20G、高压电源：DYY-10C或DYY-12型 水平摇床（WD-9405D）、电子天平 (精确1毫克) 、移液枪：WD-2108 、双显磁力搅拌器、高压蒸汽灭菌锅、pH计、水浴锅、高速台式冷冻离心机、微型离心机：WD-2105A/B等

2 实验试剂： 乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)、Tris碱、10×Buffer、 dNTP、TaqDNA聚合酶、引物、去离子甲酰胺、溴酚蓝 、 二甲苯青FF、甲叉双丙烯酰胺、丙烯酰胺、硼酸、尿素、 亲和硅烷、剥离硅烷、四甲基乙二胺、过硫酸铵、硝酸银 、DNA Marker(根据PCR片段大小选择合适的Marker范围， 如SSR实验的范围在100bp—400bp之间)

聚丙烯酰胺凝胶分为非变性凝胶和变性凝胶 所谓非变性凝胶，即在凝胶中不加SDS和巯基乙醇等变性剂，这种凝胶中，蛋白质仍保持活性，其迁移率受它的静电荷与分子大小两个因素的影响。因此在非变性凝胶中进行电泳是不能测得分子量的，常用于酶的鉴定、同工酶分析和提纯。 所谓变性凝胶，即在凝胶中加入变性剂，如尿素、SDS(十二烷基磺酸钠)、巯基乙醇、DTT等。这些变性剂可以破坏或改变蛋白质的结构，把绝大部分蛋白质分离成组成它们的亚基。同时在蛋白质分子周围包围了大量负电荷。这种电荷基本上掩盖了无变性剂存在时正常就有的任何电荷。蛋白质在这种变性凝胶中的迁移率与它们分子量的对数成直线关系。因此利用变性凝胶进行电泳可以测得蛋白质的分子量。目前应用较多的变性剂为SDS。

常有一些新用户在电泳仪器规格型号、配置的选择上有些茫然，我们特作一些提示，以供购置时参考。
电泳仪电源和电泳仪组成一套电泳仪器（为与国际接轨，2004 年我单位受国家药监局委托主持起草的新的“电泳装置”医药行业标准把原“电泳仪”与“电泳槽”两个行标合并修订，采用了国际通用产品名称，原“电泳仪”改称为“电泳仪电源”, 原“电泳槽”改称为“电泳仪”）。
电泳仪电源按电压分为超高压5000-10000V、高压1500-5000V、中压500-1500V、低压 500V 以下四种；按电流分为大电流500mA-2000mA、中电流100-500mA、小电流 100mA 以下三种；按功率分为大功率200-400W、中功率60-200W、小功率 60W 以下三种。

电泳实验名称 推荐电泳仪型号 推荐电泳仪电源型号
核酸电泳(DNA、RNA) DYCP-31BN/31CN 型( 迷你型)DYCP-31DN 型( 小号)
DYCP-31E/32B 型( 中号)

DYCP-32C 型( 大号)
DYY-3C 型 DYY-8C 型 DYY-6C 型DYY-6D 型DYY-6E 型 DYY-10C 型
DYY-11 型DYY-12D 型

蛋白质电泳 DYCZ-20H 型DYCZ-24DN( 迷你型) DYCZ-25D 型DYCZ-24EN 型( 中号) DYCZ-25E 型
DYCZ-24K 型 DYCZ-24KF 型 DYCZ-24KS 型

DYCZ-24F 型( 大号) DYCP-38C 型( 醋酸膜)
DYY-3C 型DYY-8C 型 DYY-6C 型 DYY-6D 型DYY-6E 型DYY-10C 型 DYY-12型 DYY-12D 型
DNA 序列分析电泳 DYCZ-20A/20B/20C/20D/20F/20G 型 DYY-10C 型 DYY-12 型 DYY-12C 型DYY-12D 型 DYY-15D 型
等电聚焦电泳 DYCZ-27B 型( 管状)DYCP-37B 型( 大号) DYY-16D 型 DYY-12 型 DYY-12D 型DYY-12C 型 DYY-15D 型 DYY-10C 型
转印电泳 湿转：DYCZ-40A/40B/40D/40F/40G/40K 型半干式：DYCP-40C/40E 型 DYY-7C 型DYY-5D 型
双向电泳 DYCZ-26B/26C 型 DYY-16D 型 DYY-6D 型 DYY-12D 型DYY-12C 型 DYY-15D 型 DYY-10C 型
脉冲电泳 DYCP-2101A 型 DYY-2101A 型

多用途、全功能电泳仪电源为 DYY-12 型、DYY-12C 型、DYY-12D 型、DYY-15D 型电脑三恒多用电泳仪电源。其电压高，可作包括等电聚集和DNA 序列分析电泳在内的多种电泳；电流大，可同时带几个大型电泳仪，并可进行转印电泳；功率大，可以适应各种变化要求，用途广泛。可以选择标准、定时、伏时和分步等模式电泳。液晶显示屏幕比较大。

DYY- 6C 型、DYY-6D 型、DYY-6E 型、DYY-11 型、DYY-12 型、DYY-12C 型、DYY-12D 型适宜高校学生实验和农业种子纯度检测中样品数量较多，一机多槽的电泳实验。

我公司研发的DYCZ-20G 型DNA 序列分析电泳仪是高度可调的双板测序电泳仪，实验重复性更高，大大提高了工作效率，是用于标记实验的经典选择。做引物筛选，选用DYCZ-20H 型高通量垂直电泳仪。观察分析核酸、蛋白质可选WD – 9403×型LED 蓝白双光源观察仪。做核酸电泳时，可以选择 WD-9403 系列紫外仪，以便观察和照像。如只观察电泳动态，可选 WD-9403E型手提型紫外灯。欲对电泳结果进行科学分析，请选用 WD-9413A/B/C 型凝胶成像分析系统。化学发光检测 WesternLightning、ECL\ECL plus、CDP-Star、SuperSignal、CSPD、LumiGLO 等发光底物可选WD-9423B/C 型全自动化学发光成像系统。

如需要冷却，请选择 WD-9412A 型恒温循环器。还有多种显微（细胞）电泳系统等一系列优质产品供选择。欢迎使用我公司设计的WD-9420 型通用脱色染色装置，会大幅减少电泳液使用量，既减排又经济，一举多得！

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区带电泳

是在一定的支持物上，在电场作用下，在均一的缓冲液体系，样品中带正或负电荷的离子分别向负或正极以不同速度移动，分离成一个个彼此隔开的区带。这是当前应用最广泛的电泳技术。区带电泳按支持物的物理性状不同，又可分为纸和其他纤维膜电泳、淀粉电泳、凝胶电泳。

等电点聚焦电泳

凝胶中加入两性电解质，在电场强度下形成PH梯度。样品在电泳中，环境PH大于其PI时带负电荷，向正极移动，环境的PH小于其PI时带正电荷，向负极移动，当泳动到其自身特有的等电点时，其净电荷为零，泳动速度下降到零，具有不同等电点的物质最后聚焦在各自等电点位置，形成一个个清晰的区带，分辨率极高。

电泳技术方法

电泳种类很多，电泳的原理基本相同，但不同的支持物或凝胶又有各自的特点。

1 纸电泳

2 薄层电泳

3 薄膜电泳

4 琼脂糖凝胶电泳

5 聚丙烯酰胺凝胶电泳

6 毛细管电泳

薄膜电泳

以醋酸纤维制成的薄膜作为支撑体的电泳称为薄膜电泳。 醋酸纤维是纤维素的醋酸酯，由纤维素的羟基经乙酰化而成。 将之溶于丙酮等有机溶剂中，即可涂布成均一细密的微孔薄膜， 厚度约以0.1-0.15mm为宜。 醋酸纤维素薄膜与滤纸相比较，有以下优点：

1.分离效果好。对蛋白质样品吸附极少，无拖尾现象，染色后背景能完全脱色，各种蛋白质染色带分离清晰，因而提高了定量测定的精 确性。

2.快速省时。由于亲水性较滤纸小，电渗作用小，电泳时大部分电流是由样品传导的，所以分离速度快，电泳时间短，一般电泳45-60min即可，加上染色、脱色，整个电泳完成仅需90min左右。

3.灵敏度高，样品用量少。血清蛋白电泳仅需2μL血清，故常用于检测在病理情况下微量异常蛋白的改变。

4.应用面广。某些蛋白在纸上电泳不易分离，如胎儿甲种球蛋白、溶菌酶、胰岛素、组蛋 白等用醋酸纤维素薄膜电泳能较好地分离。

5.易保存，易定量。醋酸纤维素薄膜电泳染色后，经冰乙酸、乙醇混合液或其他溶液浸泡 后可制成透明的干板，有利于扫描定量及长期保存。

由于醋酸纤维素薄膜电泳操作简单、快速、价廉。目前已广泛用于分析检测血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白、酶、多肽及其他生物大分子。

醋酸纤维素薄膜电泳

1．仪器： 中低压电源、 DYCP-38C电泳槽 、WD-9404型超级加样器

2．试剂： （1）pH8.6 巴比妥缓冲液：二乙基巴比妥酸，二乙基巴比妥 钠；

（2）染色液：丽春红S ，三氯乙酸；

（3）漂洗液：95%乙醇，冰醋酸 ；

（4）透明液：无水乙醇，冰醋酸。

3、介质：醋酸纤维素薄膜，7×9cm等

醋酸纤维素薄膜电泳注意事项:

1.粗糙面点样. 1-2μl为宜

2.恒流电泳:电流强度0.4～0.6mA/cm

3.pH8.6 巴比妥缓冲液（离子强度0.06）

4.染色5min即可

5.固定保存：将干燥的电泳图谱膜条放入透明液中浸泡10–15分钟后，取出贴于洁净玻璃板上，干燥后，即为透明薄膜图谱。